氧化苦参碱对人胰腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

氧化苦参碱对人胰腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

探讨氧化苦参碱(OM)对人胰腺癌细胞株SW1990的杀伤作用及机制.方法:取人胰腺癌细胞SW1990为研究对象,随机分为对照 (control)组和OM组,OM组再按照OM剂量不同,分为1、2、4g/L3组.用RT-PCR和Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测OM对SW1990细胞的杀伤作用,细胞侵袭力测定试剂盒检测细胞侵袭力.结果:RT-PCR显示VEGFmRNA在SW1990细胞中的表达,OM组较

control组显著降低 (0.648±0.043,0.395±0.012,0.317±0.031vs0.889±0.028,P0.05),在VEGF蛋白检测中,也得到同样结果(1.668±0.212,1.523±0.345,1.388±0.187vs1.876±0.327,均P0.05).细胞侵袭力测定显示OM 各组侵袭过Matrigel胶的细胞数显著低于control组 (325±64.43,206±84.76,124±46.78vs498±78.54,P0.05),OM组细胞侵袭能力较对照组显著降低.结论:OM 可能通过下调VEGF的表达,抑制胰腺癌细胞侵袭转移能力.

苦参的功效与作用 抗过敏

苦参中含有苦参碱，苦参碱、氧化苦参碱在1/5LD50剂量下对小鼠免疫功能均有抑制作用。兔、大鼠肌肉注射氧化苦参碱150mg/kg或100mg/kg对被动或主动皮肤过敏反应均有明显抑制作用，并对兔血清IgE抗体形成有明显抑制作用。腹腔注射氧化苦参碱200mg/kg·d，共21天，对小鼠速发型变态反应引起的死亡有保护作用。

由此可知苦参对自身免疫系统的过大免疫引起的过敏反应有一定的一直作用，能用来防治过敏。

食用水果树莓可对抗肺癌

遗传物质氧化损伤是绝大数肿瘤发生的原因之一。研究结果表明，随着树莓中植物化学物质浓度的增加，抗氧化损伤能力也随之增强。不同浓度树莓提取物对肝癌细胞系HepG-2的抑制率呈逐渐增加趋势，最高抑制率可达90%左右。

食用水果树莓可对抗肺癌

水果树莓可明显抑制肝癌细胞增殖，使肝癌细胞血管内皮生长因子的表达减弱，并使野生p53抑癌基因的表达增强。这项课题在国内外首次成功地锁定了树莓预防肝癌生长的两个特异性蛋白质作用靶点，为果蔬预防原发性肝癌提供了重要的理论依据。

树莓也称木莓、托盘、覆盆子，为蔷薇科悬钩子属多年生落叶小灌木，有750种以上，因其果型、色、味与草莓相似但长在树上，故名树莓。

此水果中含有大量的维生素C、E、超氧化物歧化酶、Y-氨基丁酸等抗衰老物质，以及鞣化酸等抗癌物质，其中维生素E和鞣化酸含量为所有水果之最。在美国，红树莓被视为癌症克星，人们赞誉它为“红宝石”。

众所周知，遗传物质氧化损伤是绝大数肿瘤发生的原因之一。研究结果表明，随着树莓中植物化学物质浓度的增加，抗氧化损伤能力也随之增强。不同浓度树莓提取物对肝癌细胞系HepG-2的抑制率呈逐渐增加趋势，最高抑制率可达90%左右。

在利用化学毒物黄曲霉毒素和二乙基亚硝胺建立的稳定大鼠原发肝癌模型上，随着树莓提取物浓度的提高，实验组大鼠肝脏上的瘤径变小，瘤的数量减少，成瘤率减低，结节程度减轻。同时，蛋白质组学研究显示，有两个蛋白质点极有可能为树莓预防肝癌的蛋白质作用靶点。

口腔粘膜炎的预防

目前有多种药物正应用于粘膜炎的预防之中，但研究显示，绝大多数药物疗效并不优于安慰剂，而另一些药物数据不是存在混杂性就是缺乏充分性。临床试验表明，仅有极少数的几类药物可有效预防癌症患者的口腔粘膜炎。

2.1 冷冻疗法——唯一经验证有效的治疗:在化疗用药期间采用冷冻疗法(口腔内含服冰块)可暂时性收缩血管，减少化疗药物在口腔粘膜中的转运，冷冻疗法可将5-FU所引发的口腔粘膜炎减少约50%。

2.2 GM-CSF:特尔立即重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子( rhGMCSF), 为多潜能的造血生长因子, 不仅能促进造血前体细胞的增殖、分化、成熟、释放, 还能直接刺激口腔黏膜的上皮细胞、成纤维细胞血管内皮细胞的生成或再生, 促进溃疡愈合，特尔立漱口液预防造血干细胞移植术后口腔溃疡发生率显著低于对照组(P<0.05) 。且因特尔立以生理盐水为载体, 与一般漱口液相比无刺激性气味, 口感较好, 患者更积极配合使用。

2.3 表皮生长因子:金因肽是一种多肽类细胞生长因子，具有促进鳞状上皮、血管内皮等多种细胞生长和调节蛋白合成的作用，从而加速创面愈合速度，提高修复质量。金因肽内还有金霉素和达克罗宁，具有表面止痛和消炎作用。

诱发胰腺癌的病因有哪些

1. 饮酒:

不同种族饮酒后其胰腺癌发病率亦有不同。据观察饮酒与美国黑人和白人胰腺癌发病率关系的研究显示,与白人相比,黑人男性嗜酒者及女性中度饮酒者均有较高发生率。

2. 吸烟:

大量的研究支持胰腺癌与吸烟之间有密切联系。

3. 慢性胰腺炎:

流行病学和分子流行病学的研究大多支持慢性胰腺炎可以发展为胰腺癌。研究显示,在5600个基因中,34个基因在胰腺癌和慢性胰腺炎患者中的表达减少,157个基因在慢性胰腺炎中表达增强,而其中的152个基因在胰腺癌中也表达增强。这项研究从分子水平证明了慢性胰腺炎与胰腺癌可能存在某些联系。

4. 咖啡:

调查发现,咖啡能使患胰腺癌的危险增加4倍。研究证明,咖啡可以抑制DNA修复并在DNA复制完成前诱导有丝分裂过程,是其致癌的主要原因。

5. 糖尿病:

实验研究表明,胰岛素在体外或体内能促使胰腺癌细胞生长;高浓度胰岛素能使胰岛素样生长因子-1受体活化,产生包括细胞周期进程改变的生长促进效应。

胰腺癌是如何发生的

胰腺癌的发病机理目前仍不清楚，目前倾向于认为胰腺癌的发生是一个渐进性、多病变、多步骤、多阶段的演变过程。在演变过程中主要包括原癌基因激活、抑癌基因功能失和受体-配体系统的过度表达等。研究发现胰腺癌细胞中某些特殊基因的改变可以用于鉴别其他胃肠道上皮来源的肿瘤，因此对这些基因的研究不仅能揭示胰腺癌的生物学特性，对其诊断和治疗均有重要意义。Johns Hopkins 大学的Hruban 等于2000年也提出了胰腺癌演变模型，推测在组织学上正常导管上皮经过导管样病变发展成为浸润癌，在遗传学上伴随着原癌基因的突变和抑癌基因的失活。北京协和医院基本外科郭俊超

胰腺癌进展模型

一、原癌基因激活：

1. K-ras：研究证明K-ras基因突变是最早的遗传学改变。K-ras基因突变率随着疾病的进展而增加，当发展成为胰腺癌时，突变率几乎达100%。K-ras基因突变后持续激活，产生一系列细胞效应，包括诱导细胞增殖、生长和浸润。现代观点认为K-ras基因 突变在胰腺癌发生过程中是一个早期事件。

二、抑癌基因失活：

1. p53：p53是一种在DNA损伤时使细胞生长暂停或直接诱导其凋亡的基因。p53基因失活在胰腺癌中发生率为40-70%。最近有文献报道同慢性胰腺炎患者或正常人相比，胰腺癌患者血清中P53蛋白浓度明显增加，而且伴远处转移的胰腺癌患者血清P53蛋白浓度明显高于未有远处转移者，因此血清P53蛋白的浓度可能成为胰腺癌诊断的标记物。

2. p16：p16基因定位于染色体9p21，其表达产物是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的抑制物之一，促使细胞进入分裂周期。p16还可调节RB1基因，阻止细胞增殖。p16基因的突变或缺失打破了p16的功能平衡，导致细胞异常生长。据报道p16基因在胰腺癌中的突变率达30%-80%，高于其他任何肿瘤。

三、受体-配体系统的过度表达：

1. 表皮生长因子受体家族：表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF )受体(EGFR, c-erbB)是一种I型生长因子酪氨酸激酶受体的跨膜蛋白，在正常导管上皮细胞表达，调控细胞生长和分化，在胰腺癌中EGFR基因表达水平明显升高。目前至少发现15种EGF样配体，如TGFα、双调蛋白(AR)、肝素结合的EGF样生长因子(HB-EGF)等，这些配体与受体形成了相互作用的复合体。与正常胰腺组织相比，胰腺癌中EGF和TGFα表达水平明显升高。

2. 转化生长因子β家族：转化生长因子β(Transforming growth factor β, TGF-β )家族由大量的调节多肽组成，包括三个异构体TGF-β1～β3、活化素(activin)、抑制素(inhibin)等。TGF-β有三个方面的功能：抑制大部分细胞增殖，但可以刺激某些间叶细胞生长;具有免疫抑制作用;促使细胞外间质形成。三个TGF-β异构体在胰腺内组成性表达，但在胰腺癌中明显增高。

3. 成纤维细胞生长因子和其受体：成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor，FGF)是多种细胞的有丝分裂原，也是细胞形成和病理生理调节子。FGF包括10个成员(FGF1-10)，在正常胰腺组织中可以检测到其表达，在慢性胰腺炎中表达升高，其中FGF1和FGF2在胰腺癌中明显升高(分别为60%和50%)。最近有研究证实FGF2在胰腺癌中的表达与肿瘤细胞和肿瘤中的内皮细胞增殖明显相关。

4. 血管内皮细胞生长因子：血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)是血管内皮细胞特异的促有丝分裂原，调节生理或病理性血管生成。VEGF在许多人类肿瘤细胞系中表达，提示其参与了肿瘤血管的形成。在正常胰腺组织中，胰岛细胞能够表达和分泌VEGF。有研究报道VEGF在胰腺癌组织的表达水平高于正常胰腺组织5.2倍，且常表现为血管数量增多、肿瘤体积大和容易局部浸润，因此，VEGF可能参与了胰腺癌组织血管形成和肿瘤生长。

云南白药的药理作用

1止血：明显促进大鼠及家兔的血小板聚集，增强血小板的活化百分率及血小板表面糖蛋白的表达，能缩短大鼠及

家兔的血液凝血时间、伤口出血时间及凝血酶原时间，对家兔动脉血管条有明显的收缩作用

2活血化瘀：抑制大鼠静脉血栓形成，缓解高分子右旋糖酐造成大鼠微循环障碍，降低大鼠全血粘度，改善血液的血流状态，加快小鼠的耳廓微循环血液速度，有一定的对抗大鼠毛细血管急性血栓形成的作用，不会出现血管内异常凝血。

3抗炎：对佐剂、角叉莱胶、异性蛋白、异性蛋白，化学制炎剂及棉球肉芽肿等制炎因子造成的动物炎症模型均有明显的对抗作用。

4 愈伤：可明显促进小鼠碱性成纤维细胞因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的生产，以及可显著促进大鼠手术区的表达和肉芽组织的增生。bFGF与VEGF可促进成纤维细胞与血管内皮细胞的生产，因此可以加速血管的生长及结缔组织增生，达到促进伤口愈合的作用。

是什么原因得胰腺癌

1、饮酒不同种族饮酒后其胰腺癌发病率亦有不同。据Silverman等观察饮酒与美国黑人和白人胰腺癌发病率关系的研究显示，与白人相比，黑人男性嗜酒者及女性中度饮酒者均有较高发生率。2、糖尿病对于胰腺癌的病因都有哪些，目前实验研究表明，胰岛素在体外或体内能促使胰腺癌细胞生长;高浓度胰岛素能使胰岛素样生长因子-1受体活化，产生包括细胞周期进程改变的生长促进效应。3、幽门螺旋杆菌对于胰腺癌的病因都有哪些，研究显示，胰腺癌患者中有Hp血清阳性结果，与对照组相比有显著差异，提示Hp感染与胰腺癌有相关性。4、咖啡调查发现，咖啡能使患胰腺癌的危险增加4倍。研究证明，咖啡可以抑制DNA修复并在DNA复制完成前诱导有丝分裂过程，是其致癌的主要原因。

云南白药胶囊作用

1、止血：明显促进大鼠及家兔的血小板聚集，增强血小板的活化百分率及血小板表面糖蛋白的表达。能缩短大鼠及家兔的血液凝血时间、伤口出血时间及凝血酶原时间，对家兔动脉血管条有明显的收缩作用。

2、活血化瘀：抑制大鼠静脉血栓形成，缓解高分子右旋糖酐造成大鼠微循环障碍，降低大鼠全血粘度，改善血液的血流状态，加快小鼠耳廓微循环血流速度。有一定的对抗大鼠毛细血管急性血栓形成的作用，不会出现血管内异常凝血。

3、抗炎：对佐剂、角叉菜胶、异性蛋白、化学致炎剂及棉球肉芽肿等致炎因子造成的动物炎症模型均有明显的对抗作用。

4、愈伤：可明显促进小鼠碱性成纤维细胞因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的生成，以及可显著促进大鼠手术区bFGF的表达和肉芽组织的增生。bFGF与VEGF可促进成纤维细胞与血管内皮细胞生成，因此可以加速血管的生长及结缔组织增生，达到促进伤口愈合的作用。

浅谈苦参碱与氧化苦参碱的相互转化及其在中药质控中的意义

苦参碱(matrine)、氧化苦参碱(oxymatrine)是豆科植物苦参、山豆根、苦豆子的主要成分，属喹诺里西啶类生物碱，二者均具有广泛的生物活性，如抗炎、抗肿瘤、镇痛、抗心率失常、镇咳、杀菌等作用。其中氧化苦参碱氮原子以配位键与氧结合(结构见Fig.1)。研究表明，苦参碱和氧化苦参碱存在相互转化，氧化苦参碱在某些条件下氮氧键裂开转化为苦参碱。中国药典2005年版一部中苦参项下为测定苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量 资料来源 :医 学 教 育网 。本文从二者相互转化的关系出发，浅谈二种成分的相互转化对于中药及中药制剂质量控制的意义。

一、苦参碱与氧化苦参碱的相互转化

1、苦参碱、氧化苦参碱的天然存在情况

2、复方制剂中的转化情况 含苦参药材的复方(止痛散、苦参汤)水煮后苦参碱含量高于氧化苦参碱，随着煎煮时间的延长，比例显著加大。

3、体内转化情况 王明雷[ 王明雷，周秋丽，王本祥. 氧化苦参碱肠内菌代谢及吸收入血活性成分的研究.

二、质量控制

1、苦参碱和氧化苦参碱的含量测定方法 对于苦参碱和氧化苦参碱含量测定的报道较多，HPLC法、高效毛细管电泳法、薄层扫描法、荧光猝灭法均可用于药材及制剂中苦参碱和氧化苦参碱含量的同时测定。灵敏度较高的LC-MS法可用于血浆中微量氧化苦参碱和苦参碱的同时测定。

2、国家标准中苦参碱和氧化苦参碱含量测定情况 中国药典2000年版药典苦参项下的含量测定为采用薄层扫描法测定苦参碱的含量，规定按干燥品计算，含苦参碱不得少于0.08%。2005年版将苦参项下的含量测定修订为采用HPLC法测定苦参碱和氧化苦参碱的含量，规定按干燥品计算，含苦参碱和氧化苦参碱总量不得低于1.2%。国家局标准苦参总碱(WS-10001(HD-1106)-2002)的质量标准中采用容量法测定苦参总生物碱的方法。国家局标准苦豆子总碱(WS-10001(HD- 1391)-2003)的质量标准中未采用测定苦参碱或氧化苦参碱的方法，为HPLC测定槐定碱(C15H24N2O)的方法。

3、目前中药制剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定状况 目前对于处方中含苦参或山豆根的制剂，以及以苦参总碱投料制成的制剂，已有的国家标准中单一成分的含量测定以测定苦参碱的含量为多。

多诱发胰腺癌的原因

胰腺癌的病因一：饮酒

不同种族饮酒后其胰腺癌发病率亦有不同。据观察饮酒与美国黑人和白人胰腺癌发病率关系的研究显示，与白人相比，黑人男性嗜酒者及女性中度饮酒者均有较高发生率。

胰腺癌的病因二：糖尿病

实验研究表明，胰岛素在体外或体内能促使胰腺癌细胞生长;高浓度胰岛素能使胰岛素样生长因子-1受体活化，产生包括细胞周期进程改变的生长促进效应。

胰腺癌的病因三：吸烟

大量的研究支持胰腺癌与吸烟之间有密切联系。吸烟引起胰腺癌的可能机制：①吸烟促使致癌物质烟草特异性N-亚硝酸盐分泌到胆管，随后反流入胰管;②烟草特异性N-亚硝酸盐对器官的特异性作用可随血流入胰腺;③吸烟增加血脂水平，促发胰腺癌。吸烟者可能因细胞甲基化水平低而易致癌。有关实验证实，保持足够的叶酸和吡哆醛浓度，可减少与吸烟相关的胰腺癌的危险性。

控制癌细胞生长信号网络的那些新药

EGFR抑制剂：靶向关键的信号通路作用于肿瘤的供血血管

主要的靶向药物旨在破坏细胞关键的信号通路，尤其是控制癌细胞生长的信号网络。其中一个通路被表皮生长因子受体(EGFR)蛋白所控制。

首款表皮生长因子受体(EGFR)药物是吉非替尼，它在2003年被批准用于非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗。两年后，FDA批准了第二款表皮生长因子受体(EGFR)药物西妥昔单抗用于治疗晚期结直肠癌，另一款类似的药物帕尼单抗也于2006年得到批准。

然而在2008年，新研究揭示携带KRAS基因突变的结直肠癌患者对西妥昔单抗和帕尼单抗产生抗性。这一发现要求对KRAS基因突变进行常规检测，以确保患者可从上述两款药物治疗中获益，同时使其他患者免于无益治疗带来的不良影响。

在2004年和2005年，FDA批准了表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂厄洛替尼用于非小细胞肺癌(NSCLC)以及晚期胰腺癌的治疗。最近，在2013年，美国FDA批准了阿法替尼用于携带EGFR基因特异突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的治疗。其他表皮生长因子受体(EGFR)靶向药物正在进行临床试验研究。