抗原或抗体检测的原理

抗原或抗体检测的原理

借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。

1.抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。

2.抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。

对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。

(1)根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原(或抗体)的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体)的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。

(2)抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分(抗原或抗体)的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高)。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清(抗原)和抗体(免疫兔血清)相比，浓度高，故应稀释抗原。

甲肝抗体检测的4种方法

双抗体夹心法

双抗体夹心法是一种借助酶免疫或放射免疫法检测抗原的技术。检测时，以已知抗体包被固相载体，相继加入待测抗原和酶或核素标记的抗体，从而形成三明治样双抗体夹心。这种检测具有很高的特异性。

双抗原夹心法

双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。检测时，受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对较高。此检测方法的关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。

双位点一步法

在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步法不但简化了操作，缩短了反应时间，还提高了检测的敏感性和特异性。

间接法

间接法的原理是利用酶标记的抗体来检测与固相结合的受检抗体，由于操作成本低，较为常用。间接法成功的关键在于抗原的纯度。

犬瘟热快速诊断试纸的原理

生物用试纸的一般原理都是抗原抗体反应.犬瘟热快速诊断试纸我没接触过，但基本可以判断和我们现在生产的传染病等试纸是同一原理.首先确定，犬瘟是一种病毒引起的疾病，那么试纸的一般就是在金标处用标记了抗犬瘟病毒的抗体蛋白的金颗粒，膜上用另一种抗犬瘟病毒的抗体蛋白(或者和金标是同一种也有可能).如果狗一旦得了狗瘟， 检测的样本中就会含有病毒，这个病毒先会被和金颗粒连接的蛋白抗体结合，再和膜上的抗体结合，就会在膜上形成一条有颜色的线，那么就可以判断得了犬瘟

早孕试纸的原理

检测试剂应用免疫层析双抗体夹心法原理，制成HCG检测试纸，可在3分钟内测定尿液标本中的HCG。检测时，当被检尿样虹吸通过胶体金标记抗体时，形成抗原抗体胶体金复合物，复合物继续爬行，通过包被的抗-HCGα亚基Mcab时，形成双抗体夹心胶体金复合物，在包被线处呈现色带，过量的胶体金抗体继续爬行，和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物，呈现色带。HCG胶体金法检测试剂盒采用双抗体夹心一步法技术，以胶体金为指示标记，检测尿液中的HCG浓度，来确诊妇女是否怀孕。试纸是协助临床判定妊娠的可靠指标。

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由受孕妇女体内胎盘产生的一种糖蛋白类激素，早早孕检测试纸采用双抗体夹心一步法技术，以胶体金为指示标记，检测尿液中的HCG浓度，来确诊妇女是否受孕。

过敏原检测时对儿童常用的方法

有两种方法，一种是血清检测，就是抽血对血液中的抗原进行检测，还有就是病体检测，就是把可能引起过敏的物质进行身体测试

对于孩子来说，通常使用的检测过敏源的方法是，通过皮肤检测或血清检测来发现过敏原，这是由于病人的皮肤、体液和血清中存在着与过敏原相应的抗体(特异性免疫球蛋白)，当相应的抗原抗体相遇时，就会出现抗原抗体反应。

皮肤试验是因为抗原抗体反应导致皮肤中的肥大细胞释放组胺使皮肤上出现风团红斑反应就像蚊子叮咬后出现的皮疹一样。皮肤试验分为点刺试验和皮内试验。

血清检测是直接检测血清中过敏原的抗体(特异性免疫球蛋白)，通过显色的方法来检测抗原抗体复合物的多少，颜色越深表示抗原抗体复合物越多。

肛周湿疹该如何诊断

1、视诊、触诊：分别指医生用视觉来观察病人全身或局部表现的诊断方法，和用手指或触觉来进行体格检查的方法，通过触、摸、按、压被检查局部、以了解体表及脏器的物理特征。

(1)首先是皮损形态的多样性，初起表现为患处皮肤潮红，肿胀，向健康皮肤蔓延，呈“红斑性湿疹”。

(2)出现散在或片状的小米粒大小的丘疹。

(3)丘疹充满浆液，形成丘疱或水疱。

(4)感染后形成脓疱，破裂后疮面渗液糜烂。

(5)渗液干燥后，形成痂皮。

(6)治疗后炎症消退，皮肤覆以鳞屑。

2、免疫反应抗原、抗体检测：抗体的主要功能是与抗原包括外来的和自身的相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物，和它们所释放的毒素或清除某些自身抗原，使机体保持正常平衡，但有时也会对机体造成病理性损害，对人体可造成危害，该检测即是对人体免疫系统中抗原与抗体的一种检测。

检测吸毒者尿液多少钱

尿中的吗啡抗原就会首先与玻璃纤维上的吗啡抗体形成抗原抗体复合物，待尿液通过第一条线时，因为抗原抗体复合物不可以和此线上的吗啡抗原结合，因此不发生任何变化;但与第二条线接触时，其中的抗抗体定会与抗原抗体复合物中的抗体结合，产生紫红色反应，因而吸毒者的尿液在试纸上只出现一条紫红色线。

而一般非吸毒者，由于尿中没有吗啡抗原，尿液会把紫红色的吗啡抗体带到测试线上，与吗啡抗原相结合，沉着下来形成第一条紫红色线;尿液带着紫红色的吗啡抗体继续移行，到对照线时又与抗抗体结合，再次形成紫红色线。这样，非吸毒者就会出现两条紫红色线。

由于“吗啡试纸”操作简单，可以快速准确地检测出吸毒者体内的微量吗啡，又容易保存和携带，因此很适合办案现场使用。此外，有关人员还可以利用“吗啡试纸”定期对强制戒毒人员进行尿样检测，了解戒毒治疗的情况，以及是否有复吸现象。至于检测吸毒者尿液多少钱是要看收费的对象，不同的机构所受的费用不用。

抗原或抗体检测的方法

由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种：

(一)沉淀反应

可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应(precipitation neaction)。

1.环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验(ring precipitationtest),此法简便易行，需用材料较多是其缺点。

2.单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验(single immunodiffusion)是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度(最低浓度)约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺点是需1～2天才能看结果

3.免疫比浊法 当抗体浓度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物，它可使通过液体的光束发生散射，随着加入抗原增多，形成的免疫复合物也增多，光散射现象也相应加强。免疫比浊法(immunonephelomytry)就是在一定的抗体浓度下，加入一定体积的样品，经过一段时间，用光散射浊度计(nephelometry)测量反应液体的浊度，来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便，可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。

4，双向免疫扩散试验 双免疫扩散试验(double immunodiffusion)是在琼脂板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析

5.对流免疫电泳对流电泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。

6.免疫电泳 免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义