可迅速检测龋齿细菌的PCR方法

可迅速检测龋齿细菌的PCR方法

日本九州大学口腔系古贺敏比古教授从分子或基因水平探讨了龋齿的发病机制。他采用PCR方法能迅速检侧龋齿细菌。

他指出，变异链球菌最初附着在牙面并同菌体表层蛋白(PAc)有关而PAc在牙面的蓄积涉及到非水溶性葡聚糖合成酶(GTF)。此外，血清型特异性多糖类在抵抗宿主细胞的吞噬中起重要作用。

评估龋齿的危险，重要的是测定变异链球菌(S.mutans)的感染水平，但目前要得到结果所用的选择培养基培养较费时间，且无法与另一龋齿细菌S.sobrinus鉴别。

据日本《医学论坛报》报道，古贺教授用PCR法从唾液中迅速简便地同时检出两种细菌。由GTF编码的变异链球菌的gtf B基因和S.sobrinus的gtf I基因经寡核苷酸引物电泳分别制成变异链球菌517碱基对、S.sobrinus717碱基对的DNA片段。

另外，作为预防龋齿措施，古贺从1984年4月在福冈县久山町实施口腔卫生指导和氟漱口，降低了龋齿率，证明了以学校为基地的氟漱口预防措施有用性。

为制定更有效预防规划，同时针对抑制变异链球菌的菌体表层蛋白和GTF-1，制成两种融合蛋白PAcA ∶SB和PAcA ∶GB，其后证明兔PAcA ∶GB抗体可抑制变异链球菌的附着。因此用PAcA ∶GB，使奶牛免疫，测定牛奶的PAc和GTF-1的抗体效价，发现初奶呈高值，用刚分娩后的奶再免疫，则牛奶的抗体效价明显上升。

8例试验者用抗菌药CPC漱口5天后分成免疫牛奶或未免疫牛奶组漱口2周，定时检查变异链球菌菌数和在全体链球菌中比例。结果发现，免疫奶漱口组变异链球菌菌数和比例被抑制，牙斑中也有同样趋势。由此说明，免疫奶对人体防龋很有用。

相关知识链接：口腔作为身体的一个重要部分，直接与外界接触,有适宜的温度和湿度，还有食物剩渣和老化坏死的细胞作为细菌的营养来源，因此口腔内必然存在着大量的细菌，包括球菌、杆菌、真菌等等。

从婴儿一出生口腔里就开始存在细菌,它们存在与口腔黏膜、牙齿、唾液中，正常情况下这些细菌不会引起疾病相反它们还会帮助阻止其他致病细菌在口腔内的生长、繁殖，减少口腔疾病的发生。但是如果口腔卫生条件不良、身体抵抗力下降，细菌的种类就会发生混乱，具有致病性的细菌也就乘机过度生长。

比如乳酸杆菌和变形链球菌的生长让我们长虫牙;梭形杆菌、黏性放线菌可以引起牙龈发炎、出血、肿痛;黑色素拟杆菌、二氧化碳噬细菌和有的放线菌容易引起牙周炎，导致牙龈流脓、牙齿松动等。有的时候口腔内的致病菌还会随着血液循环到达身体的其他地方，引起关节炎、心内膜炎等全身性疾病。

流感的诊断项目有哪些

(一)血象，白细胞总数减少，淋巴细胞相对增加，嗜酸粒细胞消失。合并细菌性感染时，白细胞总数和中性粒细胞增多。

(二)免疫荧光或免疫酶染法检测抗原，取患者鼻洗液中粘膜上皮细胞的涂征标本，用荧光或酶标记的流感病毒免疫血清染色检出抗原，出结果快、灵敏度高，有助于早期诊断。如应用单克隆抗体检测抗原则能鉴定甲、乙、丙型流感。

(三)多聚酶链反应(PCR)测定流感病毒RNA，它可直接从患者分泌物中检测病毒RNA，是个直接、快速、敏感的方法。目前改进应用PCR-酶梁(PCR-EIA)直接检测流感病毒RNA，它比病毒培养敏感得多，且快速、直接进行测定。

(四)病毒分离，将急性期病人的含漱液接种于鸡胚羊膜囊或尿囊液中，进行病毒分离。

(五)血清学检查，用血凝抵制试验。补体结合试验等测定急性期和恢复期血清中的抗体，如有4倍以上增长，则为阳性。应用中和免疫酶试验测定中和滴度，可检测中和抗体，这些都有助于回顾性诊断和流行病学调查。

得了禽流感有什么症状

一一般表现。

患者一般表现为流感样症状，如发热，咳嗽，少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适。重症患者病情发展迅速，表现为重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰;可快速进展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等。

二实验室检查。

1.血常规。白细胞总数一般不高或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，并有血小板降低。

2.血生化检查。多有肌酸激酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高，C反应蛋白升高，肌红蛋白可升高。

3.病原学检测。

1核酸检测。对患者呼吸道标本如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞采用real time PCR或RT-PCR检测到H7N9禽流感病毒核酸。

2病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。

三胸部影像学检查。发生肺炎的患者肺内出现片状影像。重症患者病变进展迅速，呈双肺多发磨玻璃影及肺实变影像，可合并少量胸腔积液。发生ARDS时，病变分布广泛。

四预后。人感染H7N9禽流感重症患者预后差。影响预后的因素可能包括患者年龄、基础疾病、合并症等。

感冒的检查诊断依据

时行感冒的检查：

1、血象：白细胞总数减少，淋巴细胞相对增加，嗜酸粒细胞消失，合并细菌性感染时，白细胞总数和中性粒细胞增多。

2、免疫荧光或免疫酶染法检测抗原：取患者鼻洗液中粘膜上皮细胞的涂征标本，用荧光或酶标记的流感病毒免疫血清染色检出抗原，出结果快，灵敏度高，有助于早期诊断，如应用单克隆抗体检测抗原则能鉴定甲，乙，丙型流感。

3、多聚酶链反应(PCR)测定流感病毒RNA：它可直接从患者分泌物中检测病毒RNA，是个直接，快速，敏感的方法，目前改进应用PCR-酶梁(PCR-EIA)直接检测流感病毒RNA，它比病毒培养敏感得多，且快速，直接进行测定。

4、病毒分离：将急性期病人的含漱液接种于鸡胚羊膜囊或尿囊液中，进行病毒分离。

时行感冒的临床诊断要点：

时行感冒呈流行性发病，多人同时发病，迅速蔓延。起病急，全身症状显著，如高热，头痛，周身酸痛，疲乏无力等，而肺系症状较轻。

时行感冒因所感病邪不同，可分为风热、风寒、暑湿等类型，主要根据恶寒、发热的程度，渴与不渴，咽喉红肿疼痛与否，以及舌苔、脉象等不同情况加以辨别。若恶寒重，发热轻属风寒;恶寒轻，发热重为风热;口不渴属风寒，口渴属风热;咽喉不红肿、不疼痛为风寒，咽喉红肿疼痛为风热;舌苔薄白为风寒，舌苔薄黄为风热，舌苔薄黄腻为暑湿;脉浮紧为风寒，脉浮数为风热，脉濡数为暑湿。

流行性感冒应该做哪些检查

(一)血象

白细胞总数减少，淋巴细胞相对增加，嗜酸粒细胞消失。合并细菌性感染时，白细胞总数和中性粒细胞增多。

(二)免疫荧光或免疫酶染法检测抗原

取患者鼻洗液中粘膜上皮细胞的涂征标本，用荧光或酶标记的流感病毒免疫血清染色检出抗原，出结果快、灵敏度高，有助于早期诊断。如应用单克隆抗体检测抗原则能鉴定甲、乙、丙型流感。

(三)多聚酶链反应(PCR)测定流感病毒RNA

它可直接从患者分泌物中检测病毒RNA，是个直接、快速、敏感的方法。目前改进应用PCR-酶梁(PCR-EIA)直接检测流感病毒RNA，它比病毒培养敏感得多，且快速、直接进行测定。

(四)病毒分离

将急性期病人的含漱液接种于鸡胚羊膜囊或尿囊液中，进行病毒分离。

(五)血清学检查

应用血凝抵制试验。补体结合试验等测定急性期和恢复期血清中的抗体，如有4倍以上增长，则为阳性。应用中和免疫酶试验测定中和滴度，可检测中和抗体，这些都有助于回顾性诊断和流行病学调查。

奇异变形杆菌检测方法

奇异变形杆菌主要污染动物性食品, 特别是肉类, 因此应加大对动物性食品中奇异变形杆菌的监测力度, 保障消费者的食用安全。目前, 有关奇异变形杆菌检测的通常采用传统的菌分离、生化反应进行鉴定, 操作复杂, 耗时较长, 不适应日常食品卫生检测监督工作的需要。近年来发展起来的分子生物学方法如PCR、多重PCR 、实时荧光PCR等广泛应用于食源性致病菌的检测,克服了传统检测方法的不足。【相关试剂推荐】天津生物芯片奇异变形杆菌核酸扩增(PCR)检测试剂盒。

PCR检测方法流程

1，细菌分离与培养

2，变形杆菌计数

女性支原体感染 检查

1.血常规

周围血白细胞总数正常或稍增多，以中性粒细胞为主。

2.X线检查

支原体肺炎胸片无特异性，多为单侧下叶浸润，表现为节段性肺炎，严重者呈广泛双侧肺炎。

3.病原学检查

痰、鼻和喉拭子培养查肺炎支原体。

4.血清学检查

血清病原抗体效价>1：32、链球菌MG凝集试验，效价≥1：40为阳性，连续两次4倍以上增高有诊断价值。

起病后2周，约2/3病人冷凝集试验阳性，滴定效价大于1：32，特别是当滴度逐步升高时，有诊断价值。约半数病人对链球菌MG凝集试验阳性。诊断的进一步证实有赖于血清中支原体IgM抗体的测定(酶联免疫吸附试验最敏感，免疫荧光法特异性强，间接血凝法较实用)。抗原检测可用PCR法，但试剂药盒还有待改进，以提高敏感性和特异性。

5.PCR技术

普通PCR技术检测肺炎衣原体特异性DNA，具有快速、简便、特异的优点，敏感性高于细胞分离技术，用套式PCR(nPCR)检测可显著提高其敏感性。

H7N9禽流感病毒造成哪些不适

一、一般表现

患者一般表现为流感样症状，如发热，咳嗽，少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适。重症患者病情发展迅速，表现为重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰;可快速进展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等。

二、实验室检查指标有：

1、 血常规。白细胞总数一般不高或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，并有血小板降低。

2、 血生化检查。多有肌酸激酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高，C反应蛋白升高，肌红蛋白可升高。

3、 核酸检测。对患者呼吸道标本(如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞)采用real time PCR(或RT-PCR)检测到H7N9禽流感病毒核酸。

4、 病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。

5、 胸部影像学检查。发生肺炎的患者肺内出现片状影像。重症患者病变进展迅速，呈双肺多发磨玻璃影及肺实变影像，可合并少量胸腔积液。发生ARDS时，病变分布广泛。

子宫内膜应该做哪些检查

1.血常规：

除非有混合感染存在，一般情况下，白细胞计数一般不高，分类计数中淋巴细胞可能增多。

2.聚合酶链反应检测

经血或组织中结核杆菌特异的荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)定量测定可对疾病做出迅速诊断。

有研究提示：PCR检测不同部位组织结核杆菌DNA是一比较快速灵敏的方法，但判断结果要考虑病程。

3.血清CA125值测定

1)测定结果：晚期腹腔结核患者血清CA125水平明显升高。

2)相关实验：

Thakur等报道(2001)，1位48岁妇女CT显示右卵巢痞块伴腹水，血清CA125值高达1255U/ml(正常0～35U/ml)，拟诊卵巢恶性肿瘤行剖腹探查术。病理组织学检查见肉芽肿，经1个月抗结核治疗后CA125水平降至42U/ml。提示伴或不伴腹水的腹部肿块患者血清CA125值异常升高也应考虑结核可能，腹腔镜检查结合组织活检可明确诊断，以避免不必要的剖腹手术，且血清CA125值检测还可用于监测抗结核治疗疗效。

流行性感冒要做哪些检查

流行性感冒检查 (一)血象 白细胞总数减少，淋巴细胞相对增加，嗜酸粒细胞消失。合并细菌性感染时，白细胞总数和中性粒细胞增多。

流行性感冒检查 (二)免疫荧光或免疫酶染法检测抗原 取患者鼻洗液中粘膜上皮细胞的涂征标本，用荧光或酶标记的流感病毒免疫血清染色检出抗原，出结果快、灵敏度高，有助于早期诊断。如应用单克隆抗体检测抗原则能鉴定甲、乙、丙型流感。

流行性感冒检查 (三)多聚酶链反应(PCR)测定流感病毒RNA 它可直接从患者分泌物中检测病毒RNA，是个直接、快速、敏感的方法。目前改进应用PCR-酶梁(PCR-EIA)直接检测流感病毒RNA，它比病毒培养敏感得多，且快速、直接进行测定。

流行性感冒检查 (四)病毒分离 将急性期病人的含漱液接种于鸡胚羊膜囊或尿囊液中，进行病毒分离。

流行性感冒检查 (五)血清学检查 应用血凝抵制试验。补体结合试验等测定急性期和恢复期血清中的抗体，如有4倍以上增长，则为阳性。应用中和免疫酶试验测定中和滴度，可检测中和抗体，这些都有助于回顾性诊断和流行病学调查。

流感需做的检查项目

(一)血象 白细胞总数减少，淋巴细胞相对增加，嗜酸粒细胞消失，合并细菌性感染时，白细胞总数和中性粒细胞增多。

(二)免疫荧光或免疫酶染法检测抗原 取患者鼻洗液中粘膜上皮细胞的涂征标本，用荧光或酶标记的流感病毒免疫血清染色检出抗原，出结果快，灵敏度高，有助于早期诊断，如应用单克隆抗体检测抗原则能鉴定甲，乙，丙型流感。

(三)多聚酶链反应(PCR)测定流感病毒RNA 它可直接从患者分泌物中检测病毒RNA，是个直接，快速，敏感的方法，目前改进应用PCR-酶梁(PCR-EIA)直接检测流感病毒RNA，它比病毒培养敏感得多，且快速，直接进行测定。

(四)病毒分离 将急性期病人的含漱液接种于鸡胚羊膜囊或尿囊液中，进行病毒分离。

(五)血清学检查 应用血凝抵制试验，补体结合试验等测定急性期和恢复期血清中的抗体，如有4倍以上增长，则为阳性，应用中和免疫酶试验测定中和滴度，可检测中和抗体，这些都有助于回顾性诊断和流行病学调查。

(六)PCR检测流感病毒基因 由于所有流感病毒基因组的各个RNA节段的5端和3端均具有保守性，故可据此设计合成引物，进行PCR检测。

PCR技术可直接从患者分泌物中检出流感病毒基因，比病毒培养法敏感，快速;但应注意可出现假阳性，出现心肌损害者，表现为心电图的异常。

子宫内膜结核的检查方法有哪些

1.除非有混合感染存在，白细胞计数一般不高，分类计数中淋巴细胞可能增多。

2.聚合酶链反应检测，经血或组织中结核杆菌特异的荧光聚合酶链反应(polymerase，chain，reaction，PCR)定量测定可对疾病做出迅速诊断。有研究提示：PCR检测不同部位组织结核杆菌DNA是一比较快速灵敏的方法，但判断结果要考虑病程。

3.血清CA125值测定，晚期腹腔结核患者血清CA125水平明显升高。Thakur等报道(2001)，1位48岁妇女CT显示右卵巢痞块伴腹水，血清CA125值高达1255U/ml(正常0～35U/ml)，拟诊卵巢恶性肿瘤行剖腹探查术。病理组织学检查见肉芽肿，经1个月抗结核治疗后CA125水平降至42U/ml。提示伴或不伴腹水的腹部肿块患者血清CA125值异常升高也应考虑结核可能，腹腔镜检查结合组织活检可明确诊断，以避免不必要的剖腹手术，且血清CA125值检测还可用于监测抗结核治疗疗效。

4.结核菌素试验，结核菌素试验阳性表明曾有过结核感染，其诊断意义不大。若为强阳性，则提示体内有活动性病灶存在，但不表明病灶部位。阴性结果也不能排除结核病。

5.结核杆菌培养和动物接种，取经血、刮取的子宫内膜、宫颈分泌物、宫腔分泌物、盆腔包块穿刺液或盆腔包裹性积液等作培养，到达2个月时检查有无阳性结果。或将这些物质接种于豚鼠腹壁皮下，6～8周后解剖检查，如在接种部位周围的淋巴结中找到结核菌即可确诊。如果结果为阳性，可进一步做药敏试验以指导临床治疗。

经血培养(取月经第1天的经血6～8ml)可避免刮宫术引起的结核扩散，但阳性率较子宫内膜细菌学检查为低。一般主张同时进行组织学检查、细菌培养和动物接种，可提高阳性确诊率。本法有一定技术条件要求，而且需时较长，尚难推广使用。

淋病有哪些诊断标准

当有类似淋病的可疑症状出现时，就需要进行淋病检查，以做出有效的诊断。淋病检查有哪些方法?淋病有哪些诊断标准?下面的内容对此问题作出了解答。

①涂片法，正确用尿道拭子取尿道内脓性分泌物做涂片检查，若结果为阳性，结合病史、潜伏期及典型的临床表现，可做出诊断;阴性者不能排除诊断。值得注意的是，涂片法若只发现多形核白细胞外的革兰氏阴性双球菌，对男性患者有一定的诊断意义，对女性患者意义不大。

②培养法，此法是诊断淋病的金标准。实验室检查，尿中少量白细胞，可有红细胞，尿培养可阳性。如多次中段尿细菌培养阴性，应考虑与泌尿系结核鉴别。

③DNA检测法，也就是核酸检测技术，即常说的PCR等，是利用淋球菌的特异性核酸片段，通过体外的不断扩增进行检测。这种方法可以检测到很低数量的淋球菌，PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径，目前上海男科医院已经开展了该检测项目。

PCR技术的高度敏感性，以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求，避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下，PCR扩增产物经凝胶电泳，观察产生的DNA可直接作出诊断。因此，PCR技术检测淋球菌实验周期短、简便快速。由于该方法技术要求及检验师的资质要求比较高，目前在沈阳可以进行该检查的医院是凤毛麟角，所以患者选择时一定要谨慎，到国家医院进行诊断检查，避免被不法行医者蒙骗医`学教育网整理。

④B型超声、排泄性尿路造影等检查，可以帮助了解有无尿路畸形、结石或肿瘤。膀胱镜检查可见脓尿、脓苔、膀胱粘膜充血、水肿或小粱，注意有无憩室、结石、异物或肿瘤。

此外还需注意，不管是哪项检查，取材时拭子伸入尿道或宫颈口内的深度应足够，男性最好在晨起首次排尿前或排尿后两小时以上取材，阳性率才有保证。而检验人员的素质及操作规范与否，或受检者检查之前有无使用抗菌药物等，均影响到检验结果。

另外，在临床中，也常见到一些病人拿着所谓MDI(多媒体显微镜)检查单来咨询。这种检查方法只是利用各种形式的多媒体显微仪，如超高倍显微仪、显微放大系统、荧光显微放大系统等进行检查。利用这种检查来诊断淋病是缺乏相应的科学根据的，更不用说其检查结果的真实性和可靠性了。